- дефектах проводки
- проводке в спирте низких концентраций
- проводке в спирте сразу высокой концентрации (+)
- медленной дегидратации
Правильный ответ — проводка в спирте сразу высокой концентрации. Резкое перемещение материала из водной среды в концентрированный этанол вызывает быстрое удаление воды из клеток и межклеточного вещества, выраженные осмотические градиенты, денатурацию белков и уплотнение тканевых структур. В результате возникает артефакт обработки — сморщивание материала с уменьшением его объёма и деформацией естественных взаимоотношений между тканевыми компонентами.
Особенно чувствительны к этому рыхлая соединительная ткань, паренхиматозные органы и ткани с высоким содержанием воды. На гистологических срезах могут появляться искусственные щели, разрывы, неравномерное уплотнение и искажение размеров клеток. Для предупреждения дефекта проводят ступенчатую дегидратацию в спиртах возрастающей концентрации с контролируемой продолжительностью каждого этапа; чрезмерно медленная проводка, напротив, может приводить к мацерации и ухудшению сохранности материала.
| Этап обработки | Основной процесс | Возможный артефакт | Профилактика |
|---|---|---|---|
| Начальная дегидратация | Постепенное удаление воды из ткани | Незначительное уплотнение | Использование спиртов низкой и средней концентрации |
| Переход в спирт высокой концентрации | Резкая дегидратация и осмотическая потеря воды | Сморщивание и деформация материала | Ступенчатое повышение концентрации этанола |
| Длительная дегидратация | Чрезмерное обезвоживание и уплотнение | Ломкость ткани, плохая пропитка парафином | Соблюдение времени проводки по типу и размеру образца |
| Просветление | Замещение спирта органическим растворителем | Пересушивание, хрупкость, усадка | Контроль времени и объёма просветляющего реагента |
| Парафиновая пропитка | Заполнение тканевых пространств средой для заливки | Неполная пропитка, пустоты и разрывы на срезе | Полное удаление спирта и адекватная инфильтрация парафином |