2) F = Cстандарта : Естандарта (+)
3) F = Естандарта : Сстандарта
4) F = Cстандарта х Естандарта
Правильный ответ: F = Cстандарта / Eстандарта. Калибровочный коэффициент показывает, какая концентрация определяемого вещества соответствует одной единице оптической плотности стандартного раствора. Здесь Cстандарта — известная концентрация стандарта, а Eстандарта — измеренная оптическая плотность, или абсорбция, этого раствора.
После вычисления фактора концентрацию вещества в исследуемой пробе определяют по формуле Cопыта = F × Eопыта. Такой расчёт применим при соблюдении закона Бугера—Ламберта—Бера, когда оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации аналита. Стандарт и исследуемый образец необходимо измерять при одинаковой длине волны, толщине оптического слоя, температуре, составе реакционной смеси и времени инкубации.
Формула Eстандарта / Cстандарта характеризует чувствительность метода, то есть изменение оптической плотности на единицу концентрации, но не является калибровочным фактором в приведённой системе расчёта. Умножение концентрации стандарта на его оптическую плотность также не имеет требуемого аналитического смысла и приводит к неправильной размерности результата.
| Показатель | Обозначение | Формула или значение | Лабораторное значение |
|---|---|---|---|
| Концентрация стандартного раствора | Cстандарта | Известная величина | Используется как референтная концентрация для калибровки |
| Оптическая плотность стандарта | Eстандарта | Измеряется фотометрически | Характеризует поглощение света стандартным раствором |
| Калибровочный коэффициент | F | F = Cстандарта / Eстандарта | Показывает концентрацию, соответствующую единице оптической плотности |
| Оптическая плотность исследуемой пробы | Eопыта | Измеряется в тех же условиях | Используется для расчёта концентрации аналита |
| Концентрация вещества в пробе | Cопыта | Cопыта = F × Eопыта | Искомый количественный результат исследования |
| Основное условие корректности | — | Линейная зависимость E от C | Измерения должны находиться в линейном диапазоне аналитического метода |
Итог: калибровочный фактор получают делением известной концентрации стандартного раствора на его оптическую плотность; затем этот коэффициент умножают на оптическую плотность исследуемой пробы.