2) 0,002 мл
3) 0,2 мл
4) 0,02 мл (+)
Правильный ответ: 0,02 мл крови. Этот объём соответствует 20 мкл и точно отбирается микропипеткой или капилляром Сали. Пробу вносят в 5 мл трансформирующего раствора, получая разведение приблизительно 1:251. Соблюдение установленного соотношения крови и реагента необходимо для достоверного фотометрического определения концентрации гемоглобина.
Под действием феррицианида калия гемоглобин окисляется до метгемоглобина, который затем взаимодействует с цианид-ионами с образованием стабильного окрашенного гемиглобинцианида. Оптическую плотность раствора измеряют фотометрически, обычно при длине волны около 540 нм; интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации гемоглобина. Ошибка при дозировании столь малого объёма крови существенно искажает результат, поэтому важны точность пипетирования, тщательное перемешивание образца и отсутствие пузырьков воздуха.
| Этап исследования | Параметр | Лабораторное значение | Возможная ошибка |
|---|---|---|---|
| Отбор биоматериала | Объём цельной крови | 0,02 мл, или 20 мкл | Неточное дозирование приводит к завышению или занижению результата |
| Приготовление пробы | Объём трансформирующего раствора | Обычно 5,0 мл | Нарушение объёма изменяет степень разведения образца |
| Химическая реакция | Определяемое соединение | Гемиглобинцианид | Недостаточное перемешивание вызывает неполное превращение гемоглобина |
| Инкубация | Выдерживание реакционной смеси | Обычно около 10 минут | Преждевременная фотометрия может дать нестабильную оптическую плотность |
| Фотометрирование | Длина волны | Около 540 нм | Неправильно выбранная длина волны снижает точность измерения |
| Контроль качества | Холостая и контрольная пробы | Используются для корректировки и проверки измерений | Отсутствие контроля затрудняет выявление систематической погрешности |