- обезвоживание и удаление спирта не обязательно
- препарат должен содержать воду и спирт
- препарат должен быть полностью обезвожен, не содержать спирт (+)
- препарат не должен содержать спирт, допустимо присутствие воды
Правильный ответ: препарат должен быть полностью обезвожен и не содержать спирт. Парафин не смешивается с водой, а остатки этанола препятствуют проникновению парафина в ткань и могут привести к неполному заполнению межклеточных пространств, рыхлости блока и появлению дефектов при приготовлении срезов.
После фиксации материал обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, затем проводят через промежуточный растворитель — обычно ксилол или его заменитель, — который удаляет спирт и делает ткань совместимой с расплавленным парафином. Присутствие воды также недопустимо: она нарушает пропитку ткани и ухудшает качество гистологического препарата. Поэтому перед заливкой необходимы последовательные этапы обезвоживания, просветления и парафиновой инфильтрации.
| Этап обработки | Основная цель | Типичные реагенты | Возможные последствия нарушения |
|---|---|---|---|
| Фиксация | Сохранение структуры клеток и тканей, предотвращение аутолиза | 10% нейтральный забуференный формалин | Аутолиз, деформация или чрезмерное уплотнение ткани |
| Обезвоживание | Удаление воды из тканевых структур | Этанол возрастающей концентрации | Сохранение воды, плохая пропитка парафином, мягкий или неоднородный блок |
| Удаление спирта и просветление | Замещение этанола средой, совместимой с парафином | Ксилол, толуол или безопасные заменители ксилола | Неполное проникновение парафина, хрупкость или крошение материала |
| Парафиновая инфильтрация | Заполнение тканевых пространств расплавленным парафином | Парафин при контролируемой температуре | Неполный блок, пустоты, разрывы и трудности при получении срезов |
| Заливка и охлаждение | Формирование плотного блока для микротомии | Парафиновая форма, холодная поверхность или охлаждающая плита | Трещины, неправильная ориентация материала, неравномерная твердость блока |