2) Циль-нильсен
3) по методу Шпильмейера
4) реактивом Шиффа (+)
Правильный ответ: реактивом Шиффа. Предварительная обработка гистологических срезов амилазой применяется как контроль при проведении ШИК-реакции (PAS-реакции). Амилаза расщепляет содержащийся в клетках и тканях гликоген до водорастворимых продуктов, которые удаляются из среза. Если после такой обработки ранее выявлявшееся малиново-красное окрашивание исчезает, это подтверждает, что ШИК-положительный материал представлял собой гликоген.
Реактив Шиффа взаимодействует с альдегидными группами, образующимися после окисления углеводных компонентов периодической кислотой. При этом ШИК-положительными могут быть не только гликоген, но и нейтральные гликопротеины, мукополисахариды, базальные мембраны и некоторые грибковые структуры. Эти вещества обычно сохраняют окраску после воздействия амилазы, поэтому сравнительное исследование обработанного и необработанного срезов позволяет провести дифференциальную гистохимическую идентификацию гликогена.
Окрашивание Суданом III предназначено для выявления липидов, метод Циля–Нильсена — кислотоустойчивых микроорганизмов, а метод Шпильмейера — миелиновых оболочек нервных волокон. Амилаза не влияет на соответствующие выявляемые субстраты, поэтому в качестве контрольной обработки при этих методиках не используется.
| Гистохимический метод | Основной выявляемый компонент | Характер окрашивания | Значение обработки амилазой |
|---|---|---|---|
| ШИК-реакция с реактивом Шиффа | Гликоген, нейтральные гликопротеины, базальные мембраны | Малиново-красное или пурпурное | Удаляет гликоген и подтверждает его природу при исчезновении окраски |
| Судан III | Нейтральные жиры и другие липиды | Оранжево-красное | Не применяется, поскольку амилаза не расщепляет липиды |
| Метод Циля–Нильсена | Кислотоустойчивые бактерии | Красные микроорганизмы на синем фоне | Диагностического значения не имеет |
| Метод Шпильмейера | Миелиновые оболочки | Темное окрашивание миелина | Не используется, так как исследуемый субстрат не является углеводом |
| ШИК-реакция после амилазы | ШИК-положительные структуры, устойчивые к ферменту | Сохраняющееся малиновое окрашивание | Указывает на гликопротеины, базальные мембраны или иные негликогеновые компоненты |
Ключевой диагностический признак: исчезновение ШИК-положительной окраски после обработки амилазой свидетельствует о наличии гликогена.