2) окисления пероксида водорода
3) восстановления глюкозы
4) окисления глюкозы
Правильный ответ: восстановление пероксида водорода. В глюкозооксидазно-пероксидазном методе сначала глюкозооксидаза катализирует окисление β-D-глюкозы кислородом с образованием глюконолактона и пероксида водорода. Количество образовавшегося H2O2 прямо пропорционально концентрации глюкозы в исследуемой пробе.
На индикаторной стадии пероксидаза использует пероксид водорода как окислитель: H2O2 восстанавливается до воды, а хромогенные субстраты одновременно окисляются с образованием окрашенного соединения. Интенсивность окраски измеряют фотометрически; в пределах аналитического диапазона она пропорциональна содержанию глюкозы. Следовательно, пероксидаза не окисляет глюкозу — эту реакцию выполняет глюкозооксидаза.
| Этап исследования | Фермент | Основные субстраты | Результат реакции | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Первичная ферментативная реакция | Глюкозооксидаза | β-D-глюкоза, O2, H2O | Глюконолактон и H2O2 | Образование пероксида водорода пропорционально концентрации глюкозы |
| Индикаторная реакция | Пероксидаза | H2O2 и хромогены | Вода и окисленный окрашенный продукт | Формирование сигнала, доступного для фотометрического измерения |
| Превращение пероксида водорода | Пероксидаза | H2O2 | Восстановление H2O2 до H2O | Правильная характеристика действия пероксидазы |
| Фотометрическая регистрация | Фермент непосредственно не участвует | Окрашенный продукт реакции | Определение оптической плотности | Расчёт концентрации глюкозы по калибратору или калибровочной зависимости |
| Возможные интерференции | — | Аскорбиновая кислота, билирубин, гемоглобин и другие восстановители | Изменение интенсивности окраски | Возможное занижение или искажение результата в зависимости от состава реагентов |
Таким образом, ключевая функция пероксидазы в данном методе — катализ восстановления пероксида водорода с сопряжённым окислением хромогенной системы и образованием измеряемой окраски.